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        食品酶免試劑盒的標本要求和操作步驟
        發布時間:2022-04-13   點擊次數:210次
         
          食品酶免試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物果糖(fructose)水平。用純化的植物果糖(fructose)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物果糖(fructose),再與HRP標記的果糖(fructose)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物果糖(fructose)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物果糖(fructose)濃度。
         
          食品酶免試劑盒的標本要求:
         
          1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
         
          2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
         
          食品酶免試劑盒的操作步驟:
         
          1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
         
          240ng/L5號標準品150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
         
          120ng/L4號標準品150µl的5號標準品加入150µl標準品稀釋液
         
          60ng/L3號標準品150µl的4號標準品加入150µl標準品稀釋液
         
          30ng/L2號標準品150µl的3號標準品加入150µl標準品稀釋液
         
          15ng/L1號標準品150µl的2號標準品加入150µl標準品稀釋液
         
          2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測樣品10µl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
         
          3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
         
          4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
         
          5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
         
          6.加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。
         
          7.溫育:操作同3。
         
          8.洗滌:操作同5。
         
          9.顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
         
          10.終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
         
          11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
         
          計算:
         
          以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。
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