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        你了解操作原代細胞的操作步驟嗎
        發布時間:2022-03-17   點擊次數:99次

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        操作步驟
        原代細胞是人工模擬細胞在體內生長的營養環境,是提供細胞營養和促進細胞生長增殖的物質基礎。培養液或培養基的含義幾乎相同,英文都是medium。當它是粉劑時,傾向性地稱為培養基,而將粉劑配成液體后,多稱為培養液。培養液中常常補加血清、抗生素等成分。

        一、復蘇

         1.把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。

         2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。

         3.把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動,使培養皿中的細胞均勻分布。

         4.標好細胞種類和日期、培養人名字等,放到CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。

         5.3天換一次培養基。

         二、傳代

         1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。

         2.把原有培養基吸掉。

         3.加適當的(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。

         4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養基終止消化。

         5.用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。

         6.把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。

         7.倒掉上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來。

         8.根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個,繼續培養。

         三、凍存

         把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。

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