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        elisa試劑盒的組成結構及檢測條件
        發布時間:2022-03-11   點擊次數:74次
           elisa試劑盒組成結構:
          1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
          2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
          3、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
          4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
          5、保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
          
          檢測elisa試劑盒結果必要條件可分為三個:
          1、ELISA加樣步驟
          在ELISA中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。凍結血清融解后,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻宜輕緩,避免氣泡,可上下倒置混和,不要在混勻器上強烈振蕩。
          
          制備血漿標本需借助于抗凝劑,而血清標本只要待血清天然凝固、待其收縮后即可取得。也可在板孔中加入稀釋液,再在其加入血清標本,然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。
          
          一般說來,在5天內測定的血清標本可放置于4℃,超過一周測定的需低溫冰存??捎米鱁LISA測定的標本十分廣泛,體液、分泌物和排泄物等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份,ELISA試劑盒中本次試驗不需用的部分應及時放回冰箱保留。
          
          2、固相載體
          加酶結合物應用液和底物用液時可用定量多道加液器,使加液過程迅速完成。如有細菌污染,菌體中可能含有內源性HRP,也會產生假陽性反應。每次加標本應更換吸嘴,以發生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。
          
          良好的儀器和準確的操縱是保證ELISA試劑盒檢測結果正確可靠的必要條件。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應為新鮮的和高質量的。有些標本可直接進行測定,有些則需經預處理。
          
          3、標本因素
          血清標本可按常規方法采集,應留意避免溶血,紅細胞溶解時會開釋出具有過氧化物酶活性的物質,以HRP為標記的ELISA測定中,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
          
          如在冰箱中保留過久,其中的可發生聚合,在間接法ELISA中可使本底加深。本文將敘述板式ELISA各個操縱步驟的留意要點,國外試劑均與特殊儀器配合應用,嚴格遵照劃定操縱,必能得出正確的結果。
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