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        快速PCR技術與快速PCR儀的區別
        發布時間:2022-01-07   點擊次數:372次

        在PCR儀上完成一個PCR反應所需要的時間決定于以下幾個因素:

        1、模塊升溫和降溫時間

        2、模塊與PCR管內溫度平衡時間

        3、延伸時間

        4、循環次數


        下面就以上幾點做一點分析,以便大家了解快速PCR技術與快速PCR儀的區別。


        1、模塊升溫和降溫度時間


        PCR儀一般會標明升溫速度和降溫速度,但標的大多是zui大變溫速度,也就是說是瞬間達到的速度。而與實驗相關的平均升降溫速度只有極少量廠家標明。以平均2度和4度(能做到平均升降溫4度的儀器極少)來計算,從95度降到55度,分別是20秒和10秒,每一個循環差20秒鐘。以一般35個循環來計算,影響實驗時間700秒,也就是不到12分鐘。實際還要考慮過沖問題,影響時間還會少些。


        2、模塊與PCR管內溫度平衡時間


        模塊溫度達到后,PCR管內的溫度遠沒有達到(塑料和水的導熱系數比鋁塊差300倍以上),需要時間來使二者達到平衡。一般有四種辦法來減少這一時間,一是讓模塊溫度過沖,在管內溫度快達到時降到目標溫度,但太高的過沖可能造成實際溫度過沖,影響PCR反應結果;二是減少PCR反應液的體積,但體積變小時PCR反應的可靠性會降低;三是降低PCR管的厚度,但太薄時強度不夠;四是增加PCR管與模塊貼附程度。

        ELISA試劑盒

        3、延伸時間

        延伸時間與PCR產物的長度和DNA聚合酶的合成速度有關。如果PCR產物長度少于100bp時,可能考慮將延伸時間變為0(即兩步法);采用高速的DNA聚合酶也是常用的方法,但并不是所有PCR實驗都可以用高速的DNA聚合酶。


        4、循環次數


        循環次數與模板量及檢測要求相關。


        所謂快速PCR技術是將快速PCR儀與超薄管(或特殊貼附技術)以及高速DNA聚合酶等技術整合在一起,可達到較短時間完成PCR反應。而一些廠家在向用戶推xiao PCR儀時,不去說明快速PCR技術,只強調PCR儀速度快(大都用升降溫速度來HuYou用戶)。好像買了快速PCR儀后,原來1個半小時的擴增時間變會縮短成半小時似的。而用戶采購了快速PCR儀后才發現并不那么回事。有不少用戶采用快速模式根本就做不出好的實驗結果。特別是進行多重PCR擴增的用戶,系統用于身份鑒定的試劑。


        快速PCR技術與快速PCR儀是兩回事??焖貾CR儀只能縮短PCR反應時間10分鐘左右,要實現真正的快速PCR反應,還需要其他一些努力。大多數用戶根本就不需要快速PCR技術。

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