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        蛋白試劑盒的優點及使用方法
        發布時間:2021-12-21   點擊次數:311次
           BCA蛋白試劑盒是進行蛋白質濃度測定的最常見的方法之一。BCA蛋白定量的主要原理是:蛋白質在堿性條件下,可以將二價Cu2+離子還原成一價Cu+離子。產生的一價Cu+離子可以與BCA(Bicinchoninicacid)試劑結合,最終生成紫色的復合物。該復合物在562nm處有很強的吸收峰。復合物的多少與蛋白質的濃度呈接近的線性關系。
          
          ?一、BCA蛋白試劑盒有許多優點:
          1、檢測的靈敏度高,檢測的蛋白質濃度下限可達20μg/mL。
          2、線性范圍廣,在20-2000μg/mL的范圍內,呈接近的線性關系。
          3、兼容性良好,產品可以兼容的化學物質非常廣泛。
          
          二、使用方法:
          1、BCA工作液的配制
         ?。?)BCA工作液總體積的計算:
          BCA工作液總體積=(標準品數量+待測樣品數量+1)×重復數×200μL。
          舉例:如果標準品數量為8,待測樣品數量1,重復數為3,則BCA工作液總體積=(8+1+1)×3×200μL=6000μL
         ?。?)BCA工作液的配制:按50體積的BCA試劑A中加入1體積的BCA試劑B(A:B=50:1),充分混勻。
          舉例:將5000μL的BCA試劑A與100μL的BCA試劑B混合,得到5100μL的BCA工作液。
          
          2、BSA標準品的配制
          將BSA標準品做系列稀釋,分別得到如下9個不同濃度的標準品:2000μg/mL,1500μg/mL,1000μg/mL,500μg/mL,250μg/mL,125μg/mL,62.5μg/mL,31.25μg/mL,0μg/mL。
          注:嚴格的蛋白定量,BSA標準品的稀釋溶液應該與待測蛋白樣品的溶液相同。但是一般情況下,BSA標準品可以直接用0.9%的NaCl、PBS或者去離子水進行稀釋。
          
          3、取BSA標準品和待測樣品各25μL到96孔板孔內,
          注:正常情況下,樣品與BCA工作液的體積之比應為1:8。如果樣品體積有限,也可使用10μLBSA標準品和待測樣品進行檢測(即樣品與BCA工作液的體積之比為1:20),這時BCA定量試劑盒的檢測范圍較小為125-2000μg/mL。
          
          4、往每孔中加入200μL的BCA工作液,蓋上96孔板蓋子。
          
          5、將96孔板放37℃,30分鐘。
          
          6、用酶標儀測562nm處的光吸收值。
          注:562nm為最強的光吸收波長。如果無法檢測562nm處的光吸收值,也可以在540~595nm波長范圍內檢測光吸收值。
          
          7、根據BSA標準品的光吸收值(扣除空白孔的光吸收值即為最終的讀數),繪制標準曲線。依據標準曲線計算待測樣品的蛋白濃度。
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