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        Elisa試劑盒的溫育是如何進行的
        發布時間:2021-11-11   點擊次數:506次

        Elisa試劑盒的操作因固相載體的形成不同而有所差異,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。國內醫學檢驗一般均用板式點。

        Elisa試劑盒的操作步驟:

         方法一:用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:

         1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。

         2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

         3. 加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。

         4. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。

         5. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

         6. 結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:小鼠ELISA試劑盒反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或較淺,依據所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔O·D值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

        ELISA試劑盒

        方法二:用于檢測未知抗體的間接法:

        用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

        其中還有一個步驟特別需要注意那就是洗滌:

        洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應步驟,但卻也決定著實驗的成敗。ELSIA就是靠洗滌來達到分離游離的和結合的酶標記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反應過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質。聚苯乙烯等塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應把這種非特異性吸附的干擾物質洗滌下來??梢哉f在ELISA操作中,洗滌是非常主要的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴格按要求洗滌,不得馬虎。

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