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        細胞凍存的正確方法你用對了嗎
        發布時間:2021-10-09   點擊次數:308次

        我們在做細胞實驗的時候經常會有凍存的的情況,但細胞凍存的正確方法你用對了嗎?

        首先冷凍保存方法:

        1、傳統方法:冷存管置于4C10分鐘-->-20C30分鐘-->-80C 16~ 18小時(或隔夜)-->液氮槽vaporphase長期儲存。

        -20C不可超過1小時,以防止胞內冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80C冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

        2、程序降溫:利用已設定程序的等速降溫機以-1~-3C/分鐘之速度由室溫降至(-80C以下) -120C,再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細胞與hybridoma之保存。

        3、HAKATA無血清細胞凍存: 加入HAKATA無血清細胞凍存液制成懸液,直接凍于-80°C,可保存≥5年。

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        其次操作步驟:

        1、冷凍前24-48小時更換半里或全里培養基,使細胞處于指數生長期。

        2、配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養基、血清,逐滴加入二甲基亞礬(DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。

        3、離心收集培養之細胞,用加血清的培養基重懸起細胞,取少里細胞懸浮液(約0.1m1)計數細胞濃度及凍前存活率。

        4、取與細胞懸液等里的凍存液,緩慢逐商加入細胞懸液,并晃動試管,制成細胞凍存懸液( DMSO醉后濃度為5~ 10%),使細胞濃度為1~5x 10*cells/ml,混合均勻,分裝于已標示完全之冷凍保存管中,1~ 2nl/mal,并取.少里細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后,注明細胞名稱、代數、日期。然后進行凍存。

        上海通蔚生物科技有限公司

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