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        枯草芽孢桿菌常用培養基的配制
        發布時間:2011-05-05   點擊次數:8791次

          枯草芽孢桿菌常用培養基的配制方法;

        1L蒸餾水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化鈉+0.5g牛肉膏+20g瓊脂

            枯草芽孢桿菌原生質體的制備 

            1 培養枯草芽孢桿菌 
        取親本菌株T4412、TT2 新鮮斜面分別接一環到裝有液體完全培養基(CM)的試管中,36℃振蕩培養14 h,各取1 mL 菌液轉接入裝有20 mL 液體完全培養基的250 mL 錐形瓶中,36℃振蕩培養 3 h,使細胞生長進入對數前期,各加入25 u/mL 青霉素,使其終濃度為0.3 u/mL,繼續振蕩培養2 h。 

            2. 收集細胞 
        各取菌液10 mL,4000 r/min 離心10 min,棄上清液,將菌體懸浮于磷酸緩沖液中,離心。如此洗滌兩次,將菌體懸浮10 mL SMM 中,每mL 約含108~109 活菌為宜。 

            3. 總菌數測定 
        各取菌液0.5 mL,用生理鹽水稀釋,取10-5、10-6、10-7 各1mL(每稀釋度作兩個平板)、傾注完全培養基,36℃培養24 h 后計數。此為未經酶處理的總菌數。 

            4. 脫壁 
            二株親本菌株各取5 mL 菌懸液,加入5 mL 溶菌酶溶液,溶菌酶濃度為100 ug/mL,混勻后于36℃水浴保溫處理30 min,定時取樣,鏡檢觀察原生質體形成情況,當95%以上細胞變成球狀原生質體時,用4000 r/min 離心10 min,棄上清液,用高滲緩沖液洗滌除酶,然后將原生質體懸浮于5 mL 高滲緩沖液中。立即進行剩余菌數的測定。 

            5. 剩余菌數測定 
            取0.5 mL 上述原生質體懸液,用無菌水稀釋,使原生質體裂解死亡,取10-2、10-3、10-4 稀釋液各0.1 mL,涂布于完全培養基平板上,36℃培養24~48 h,生長出的菌落應是未被酶裂解的剩余細胞。 
            計算酶處理后剩余細胞數,并分別計算二親株的原生質體形成率。原生質體形成率=未經酶處理的總菌數一酶處理后剩余細胞數。

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