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        上海通蔚生物ELISA常用的幾個方法優缺點你都知道嗎?
        發布時間:2022-06-22   點擊次數:80次

        上海通蔚生物ELISA常用的幾個方法優缺點你都知道嗎,我們通過自主創新以及與國內外的科研單位合作研發,不斷突破新技術,一直秉承著代理優質品牌的產品,服務好每一位顧客,將先進的科學技術和方法推薦給顧客。ELISA是一種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。

        酶聯免疫吸附試驗的標準程序,通常是把蛋白、抗體、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗體(capture Ab)固定在固相載體上,再加入一級檢測抗體(primarydetection Ab),形成一個抗原抗體的復合物。如果該抗體已經用酶(enzyme)標記了,即可用來直接測定抗原的量,若無,則可利用另一個酶標記的二級抗體來測定抗原的量。測定抗原量的方法是加入該酶的底質(substrate),作用后產生出現的顏色深淺和樣本中的抗原量呈正比的關系,依此原理計算出樣本中的抗原總量或濃度。

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        1.直接法(direct ELISA)

        將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標記的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特異性非常重要。

        優勢:操作手續簡短,因無須使用二抗可避免交互反應。

        缺點:試驗中的一抗都得用酶標記,但不是每種抗體都適合做標記,費用相對提高。

         

        2.間接法(indirect ELISA)

        此測定方法與直接法類似,差別在于一級抗體沒有酶標記,改用酶標記的二級抗體去辨識一級抗體來測定抗原量。

        優勢:二抗可以加強信號,而且有多種選擇能做不同的測定分析。不加酶標記的一級抗體則能保留它多的免疫反應性。

        缺點:交互反應發生的機率較高。

         

        3.雙抗體夾心法(sandwich ELISA)

        被檢測的抗原包被在兩個抗體之間,其中一個抗體將抗原固定于固相載體上,即捕捉抗體。另一個則是檢測抗體,此抗體可用酶標記后直接測定抗原的量;或不標記,再透過酶標記的二級抗體來測定抗原的量。這兩種抗體必須小心選取,才可避免交互反應或競爭相同的抗原結合部位。

        優勢:高靈敏、高專一性,抗原無須事先純化。

        缺點:抗原一定得擁有兩個以上的抗體結合部位。

         

        4.競爭法(competitive ELISA)

        樣本里的抗原(自由抗原)和純化并固定在固相載體上的抗原(固定抗原)一起競爭相同的抗體,當樣品里的自由抗原越多,就可以結合越多的抗體,而固定抗原就只能結合到較少的抗體,反之亦然。經清洗步驟,洗去自由抗原和抗體的復合物,只留下固定抗原和抗體的復合物,拿來與只有固定抗原的對照組結果相比較,根據呈色差異就可計算出樣品里的抗原含量。

        優勢:可適用比較不純的樣本,而且數據再現性很高。

        缺點:整體的敏感性和專一性都較差。


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        上海通蔚生物科技有限公司

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